AUTORES
- Javier Sierra Cremallé. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. FITA – Fundación de Innovación y Transferencia Agroalimentaria de Aragón, Zaragoza, España.
- Joan Marín Egea. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Zaragoza, España.
- Lucía Romeo Arnal. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. FITA – Fundación de Innovación y Transferencia Agroalimentaria de Aragón, Zaragoza, España.
- Diego Moliner Manada. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Zaragoza, España.
- Aroa Calvo Sanjuan. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Zaragoza, España.
- Marta Fernández Marín. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Hospital Nuestra Señora de Gracia, Zaragoza, España.
RESUMEN
La vitamina D desempeña un papel esencial en la homeostasis del calcio y del fósforo y participa en procesos relacionados con la salud ósea y otras funciones fisiológicas. La evaluación analítica del estado vitamínico se realiza principalmente mediante la determinación sérica de 25-hidroxivitamina D [25(OH)D], metabolito que refleja de forma más adecuada las reservas circulantes de vitamina D. Las concentraciones pueden medirse mediante inmunoensayos automatizados o técnicas cromatográficas, especialmente cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem. La elección del método, la estandarización y la trazabilidad son relevantes debido a las diferencias de calibración y a la posible variabilidad entre plataformas. La interpretación debe considerar las características clínicas del paciente, la variabilidad biológica y los intervalos o puntos de corte utilizados por cada laboratorio. La concentración de 1,25-dihidroxivitamina D no debe utilizarse como prueba rutinaria para valorar las reservas de vitamina D porque está regulada por mecanismos hormonales y puede mantenerse normal o aumentar incluso cuando existe insuficiencia. Este trabajo revisa los principales aspectos analíticos de la determinación de 25(OH)D, sus métodos, limitaciones e interpretación clínica.
PALABRAS CLAVE
Vitamina D, 25-hidroxivitamina D, calcifediol, deficiencia de vitamina D, pruebas de laboratorio, estado nutricional.
ABSTRACT
Vitamin D plays an essential role in calcium and phosphate homeostasis and is involved in bone health and other physiological functions. Analytical assessment of vitamin D status is mainly based on serum 25-hydroxyvitamin D [25(OH)D], the metabolite that most appropriately reflects circulating vitamin D stores. Concentrations can be measured using automated immunoassays or chromatographic methods, particularly liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Method selection, standardization, and traceability are important because calibration differences and inter-assay variability may affect comparability. Interpretation should consider the patient’s clinical characteristics, biological variation, and the reference intervals or decision thresholds used by the laboratory. Serum 1,25-dihydroxyvitamin D should not be used routinely to assess vitamin D stores because its concentration is tightly regulated and may remain normal or increase even when vitamin D status is low. This article reviews the main analytical aspects of 25(OH)D measurement, including methods, limitations, and clinical interpretation.
KEY WORDS
Vitamin D, 25-hydroxyvitamin D, calcifediol, vitamin D deficiency, laboratory tests, nutritional status.
DESARROLLO DEL TEMA
El objetivo para este artículo monográfico es describir los principales aspectos de la determinación analítica de vitamina D, con especial atención a la medición de 25(OH)D, los métodos de laboratorio disponibles, los factores que pueden influir en el resultado y los criterios generales de interpretación.
La vitamina D es una hormona esteroidea implicada en la regulación del metabolismo del calcio y del fósforo. Su disponibilidad depende de la síntesis cutánea, la ingesta dietética y la transformación metabólica que tiene lugar principalmente en el hígado y el riñón¹,².
La principal magnitud bioquímica utilizada para valorar el estado de vitamina D es la concentración sérica de 25-hidroxivitamina D [25(OH)D]. Este metabolito presenta una vida media mayor que la de la forma activa y permite aproximarse a las reservas circulantes del organismo¹,³.
METABOLISMO Y MARCADOR ANALÍTICO:
La vitamina D procedente de la piel y de la dieta se transforma inicialmente en 25-hidroxivitamina D en el hígado. Posteriormente, en el riñón y otros tejidos puede convertirse en 1,25-dihidroxivitamina D, la forma biológicamente activa que interviene en la regulación del metabolismo mineral¹, ².
A pesar de su actividad biológica, la 1,25-dihidroxivitamina D no representa de forma adecuada los depósitos de vitamina D. Su concentración está regulada por mecanismos hormonales y puede permanecer normal en situaciones de insuficiencia de vitamina D¹,³.
DETERMINACIÓN DE 25(OH)D:
La determinación de 25(OH)D en suero o plasma constituye la prueba analítica de referencia para valorar el estado de vitamina D. La concentración debe interpretarse considerando el método empleado y los criterios de decisión definidos para la población estudiada¹,³.
En los laboratorios clínicos se utilizan diferentes plataformas automatizadas basadas en inmunoensayos. Estas técnicas permiten procesar un elevado número de muestras y facilitan la integración de la determinación en los sistemas automatizados de bioquímica e inmunoanálisis³,⁴.
MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS:
La cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) permite separar y cuantificar diferentes metabolitos de vitamina D con elevada especificidad analítica. Además, puede distinguir formas como 25(OH)D2 y 25(OH)D3³,⁵.
Aunque LC-MS/MS presenta ventajas en especificidad y capacidad de caracterización, requiere equipamiento especializado, personal entrenado y procedimientos de control de calidad adecuados. Por ello, en numerosos laboratorios se utilizan inmunoensayos automatizados para la práctica asistencial habitual⁴,⁵.
INMUNOENSAYOS:
Los inmunoensayos ofrecen rapidez, automatización y capacidad de procesamiento elevada, pero pueden presentar diferencias de rendimiento entre plataformas debido a la especificidad de los anticuerpos, la calibración y posibles interferencias³,⁴.
La comparación de resultados entre laboratorios debe realizarse con cautela cuando se han utilizado métodos diferentes. La estandarización y la trazabilidad frente a materiales de referencia son importantes para mejorar la comparabilidad de las concentraciones obtenidas³,⁵.
ESTANDARIZACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD:
La variabilidad analítica ha sido uno de los problemas históricos de la medición de 25(OH)D. Los programas de estandarización buscan reducir las diferencias entre métodos mediante materiales y procedimientos de referencia que permitan obtener resultados comparables³,⁵.
El control interno de calidad permite vigilar la estabilidad del método y detectar desviaciones antes de liberar resultados. La evaluación externa del desempeño aporta información adicional sobre la concordancia del laboratorio con otros métodos y centros⁴,⁶.
FACTORES PREANALÍTICOS:
La concentración de 25(OH)D puede variar según la estación del año, la exposición solar, la edad, la pigmentación cutánea, la ingesta de vitamina D y determinadas situaciones fisiológicas o clínicas. Estos factores deben considerarse cuando se interpreta un resultado aislado¹,².
La muestra debe recogerse, identificarse, transportarse y conservarse siguiendo el procedimiento normalizado del laboratorio. Aunque 25(OH)D es relativamente estable, las condiciones de almacenamiento y el manejo de muestras deben estar validados para cada procedimiento⁴,⁶.
INTERPRETACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN:
La interpretación del resultado debe realizarse utilizando los intervalos de referencia o puntos de corte adoptados por el laboratorio y teniendo en cuenta la población de referencia. No existe un único umbral universal aplicable de manera idéntica a todas las personas y situaciones clínicas¹, ³.
Concentraciones bajas pueden ser compatibles con insuficiencia o deficiencia de vitamina D, pero la clasificación debe realizarse de acuerdo con la guía o criterio clínico utilizado. La decisión de suplementar no depende exclusivamente de una cifra analítica aislada¹,².
1,25-DIHIDROXIVITAMINA D:
La medición de 1,25-dihidroxivitamina D tiene indicaciones específicas y no debe utilizarse como sustituto de la determinación de 25(OH)D para evaluar las reservas de vitamina D. Puede ser útil en situaciones relacionadas con alteraciones del metabolismo del calcio y del fósforo o con determinadas enfermedades renales y endocrinas¹,³.
VITAMINA D2 Y D3:
La 25(OH)D circulante procede principalmente de dos formas, 25(OH)D2 y 25(OH)D3. Los métodos de laboratorio pueden diferir en su capacidad para reconocer y cuantificar ambas fracciones, lo que constituye una fuente potencial de variabilidad entre plataformas³,⁵.
Los procedimientos de referencia basados en LC-MS/MS permiten separar ambas formas y pueden contribuir a la estandarización de los métodos. En la práctica habitual, muchos inmunoensayos proporcionan un resultado combinado de 25(OH)D³, ⁵.
UTILIDAD CLÍNICA:
La determinación de 25(OH)D puede ser útil en personas con riesgo elevado de alteraciones del metabolismo mineral o cuando existe sospecha clínica de deficiencia. El uso de la prueba debe responder a una indicación clínica y no necesariamente a un cribado universal de la población¹,².
En personas sometidas a tratamiento, la evolución de la concentración puede ayudar a valorar la respuesta cuando existe una indicación clínica para realizar controles analíticos. La frecuencia de las determinaciones debe individualizarse según el contexto y el tratamiento¹,⁴.
LIMITACIONES:
Entre las principales limitaciones se encuentran la variabilidad entre métodos, las diferencias de calibración y el efecto de determinadas interferencias. Por ello, los cambios pequeños entre dos resultados deben interpretarse teniendo en cuenta la variabilidad analítica y biológica³,⁵.
Una concentración sérica de 25(OH)D debe interpretarse junto con otros datos clínicos y analíticos. El resultado no permite por sí solo establecer la causa de una concentración baja ni determinar todas las consecuencias funcionales del déficit¹,².
PAPEL DEL LABORATORIO CLÍNICO:
El laboratorio clínico es responsable de seleccionar un método adecuado, mantener la trazabilidad, aplicar controles de calidad y proporcionar intervalos de referencia o criterios de interpretación coherentes con la población atendida³,⁶.
La correcta gestión de las fases preanalítica, analítica y postanalítica mejora la utilidad clínica de la determinación. La comunicación clara de unidades, método utilizado y posibles limitaciones facilita la interpretación por parte del profesional sanitario⁴,⁶.
CONCLUSIÓN
La determinación sérica de 25-hidroxivitamina D constituye la principal herramienta analítica para valorar el estado vitamínico de vitamina D. Los inmunoensayos automatizados permiten una determinación rápida y accesible, mientras que las técnicas de referencia basadas en LC-MS/MS ofrecen una elevada especificidad y permiten diferenciar las formas D2 y D3. La interpretación debe considerar el método utilizado, la estandarización, la variabilidad biológica y la situación clínica. La medición de 1,25-dihidroxivitamina D se reserva para indicaciones específicas y no sustituye a 25(OH)D en la valoración de las reservas.
BIBLIOGRAFÍA
- Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med [Internet]. 2007;357(3):266-281 [citado 28 ago 2026]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17634462/
- Bouillon R, Marcocci C, Carmeliet G, Bikle D, White JH, Dawson-Hughes B, et al. Skeletal and extraskeletal actions of vitamin D: current evidence and outstanding questions [Internet]. Endocr Rev. 2019;40(4):1109-1151 [citado 28 ago 2026]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30686066/
- Sempos CT, Vesper HW. Standardizing laboratory measurements of vitamin D status [Internet]. Endocrinol Metab Clin North Am. 2017;46(4):885-903 [citado 28 ago 2026]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29080693/
- National Institutes of Health, Office of Dietary Supplements. Vitamin D: fact sheet for health professionals [Internet]. Bethesda (MD): NIH; 2025 [citado 28 ago 2026]. Disponible en: https://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/
- Tai SS, Bedner M, Phinney KW. Development of a candidate reference measurement procedure for the determination of 25-hydroxyvitamin D3 and 25-hydroxyvitamin D2 in human serum using isotope-dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry [Internet]. Anal Chem. 2010;82(5):1942-1948 [citado 28 ago 2026]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20136106/
- International Organization for Standardization. ISO 15189:2022 Medical laboratories — Requirements for quality and competence [Internet]. Geneva: ISO; 2022 [citado 28 ago 2026]. Disponible en: https://www.iso.org/standard/76677.html
