AUTORES
- Joan Marín Egea. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Zaragoza, España.
- Marta Fernández Marín. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Hospital Nuestra Señora de Gracia, Zaragoza, España.
- Javier Sierra Cremallé. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. FITA – Fundación de Innovación y Transferencia Agroalimentaria de Aragón, Zaragoza, España.
- Diego Moliner Manada. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Zaragoza, España.
- Aroa Calvo Sanjuan. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Zaragoza, España.
- Lucía Romeo Arnal. Técnico Superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico. FITA – Fundación de Innovación y Transferencia Agroalimentaria de Aragón, Zaragoza, España.
La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria causada por Trypanosoma cruzi. Aunque históricamente se ha asociado con América Latina, actualmente también se diagnostica en otros continentes como consecuencia de los movimientos de población. El diagnóstico depende de la fase de la infección. Durante la fase aguda, la elevada parasitemia permite detectar directamente el parásito en sangre, mientras que, durante la fase crónica, cuando la parasitemia es baja, el diagnóstico se basa principalmente en la detección de anticuerpos específicos mediante técnicas serológicas. Entre estas metodologías destacan el ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) y la hemaglutinación indirecta (HAI). El objetivo de este trabajo es revisar y comparar ambas técnicas, centrándose en su fundamento y utilidad en el diagnóstico de la infección crónica. ELISA permite procesar numerosas muestras y facilita la automatización del laboratorio, mientras que la HAI emplea un principio analítico diferente y puede utilizarse como prueba complementaria. Los estudios disponibles muestran diferencias en el rendimiento de las técnicas según el método y los antígenos empleados. Por este motivo, las recomendaciones actuales apoyan la utilización de dos pruebas serológicas basadas en diferentes antígenos, especialmente cuando se pretende confirmar una infección crónica. La combinación de metodologías permite aumentar la fiabilidad diagnóstica y facilita la resolución de resultados discordantes.
Enfermedad de Chagas, ensayo de inmunoadsorción enzimática, pruebas de hemaglutinación, trypanosoma cruzi, serodiagnóstico.
Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi. Although historically associated with Latin America, it is currently diagnosed in other continents as a consequence of population movements. Diagnosis depends on the stage of infection. During the acute phase, high parasitemia allows direct parasite detection in blood, whereas during the chronic phase, when parasitemia is low, diagnosis is mainly based on the detection of specific antibodies by serological methods. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect hemagglutination assay (IHA) are among the main techniques used. This article reviews and compares both methods, focusing on their principles and usefulness in the diagnosis of chronic infection. ELISA allows numerous samples to be processed and facilitates laboratory automation, whereas IHA uses a different analytical principle and may be used as a complementary test. Available studies show differences in diagnostic performance depending on the method and antigens used. Therefore, current recommendations support the use of two serological tests based on different antigens, particularly when confirming chronic infection. Combining different methodologies increases diagnostic reliability and facilitates the resolution of discordant results.
Chagas Disease, enzyme-linked immunosorbent assay, hemagglutination tests, trypanosoma cruzi, serodiagnosis.
DESARROLLO DEL TEMA
El objetivo de este artículo monográfico es comparar las técnicas ELISA y hemaglutinación indirecta utilizadas en el diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas, describiendo su fundamento, principales características y utilidad en la confirmación de la infección crónica por Trypanosoma cruzi.
La enfermedad de Chagas, también denominada tripanosomiasis americana, es una enfermedad infecciosa causada por el protozoo Trypanosoma cruzi. Aunque tradicionalmente se ha relacionado con América Latina, actualmente se diagnostica también fuera de las zonas endémicas debido a los movimientos de población¹.
La transmisión puede producirse mediante insectos triatominos infectados y también por otras vías, como la transmisión congénita, la transfusión de sangre y productos sanguíneos, el trasplante de órganos, la transmisión oral y los accidentes de laboratorio¹.
La enfermedad presenta una fase aguda y otra crónica. Durante la fase aguda existe una mayor cantidad de parásitos circulantes, por lo que pueden utilizarse técnicas destinadas a detectar directamente el microorganismo en sangre. Durante la fase crónica, la parasitemia disminuye y la detección de anticuerpos frente a T. cruzi mediante pruebas serológicas adquiere una importancia fundamental¹.
Entre las principales técnicas serológicas se encuentran ELISA, la hemaglutinación y la inmunofluorescencia indirectas. La Organización Mundial de la Salud también recoge estas metodologías entre las utilizadas para el diagnóstico de la fase crónica¹.
Diagnóstico de la fase crónica:
En la fase crónica, la baja concentración de parásitos circulantes dificulta su detección directa. Por este motivo, la identificación de anticuerpos específicos mediante pruebas serológicas constituye la estrategia diagnóstica principal¹.
Las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud y la Organización Panamericana de la Salud contemplan la utilización de dos pruebas serológicas basadas en diferentes antígenos para confirmar la infección. Cuando los resultados son discordantes, se recomienda realizar una tercera prueba para resolver la discrepancia².
Esta estrategia es importante porque las distintas técnicas pueden presentar diferencias de sensibilidad y especificidad según los antígenos utilizados, la metodología y las características de la población estudiada².
Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas
El ELISA es una técnica inmunológica utilizada para detectar anticuerpos específicos frente a T. cruzi. En los ensayos serológicos, los antígenos del parásito se fijan a una fase sólida y posteriormente se añade el suero del paciente. Si existen anticuerpos específicos, estos se unen a los antígenos y pueden detectarse mediante un sistema de conjugación enzimática³.
Una de sus principales ventajas es la posibilidad de procesar un elevado número de muestras y automatizar diferentes etapas del procedimiento. Estas características hacen que sea una técnica especialmente útil en laboratorios clínicos con una elevada carga de trabajo³.
Los antígenos empleados pueden proceder de extractos del parásito o estar constituidos por proteínas recombinantes. La selección de los antígenos puede influir considerablemente en el rendimiento diagnóstico de la técnica³.
Un estudio multicéntrico realizado en seis países latinoamericanos evaluó proteínas recombinantes de T. cruzi para el diagnóstico serológico. La combinación de determinadas proteínas recombinantes alcanzó una sensibilidad del 99,4 % y una especificidad del 99,3 % en el conjunto de muestras analizadas³.
Además, una revisión sistemática y metaanálisis que incluyó 56 estudios encontró para ELISA una mediana de sensibilidad del 99 % y una mediana de especificidad del 99 %⁴.
Estos resultados muestran el elevado rendimiento que puede alcanzar ELISA, aunque no deben considerarse valores universales para todos los ensayos. Las diferencias en los antígenos, las poblaciones estudiadas y los criterios utilizados pueden modificar los resultados⁴.
La hemaglutinación indirecta es una técnica serológica basada en la utilización de eritrocitos sensibilizados con antígenos. En presencia de anticuerpos específicos frente a T. cruzi, se produce una reacción de aglutinación que puede observarse mediante la lectura de la reacción⁵.
La HAI utiliza un principio analítico diferente al ELISA, por lo que puede aportar información complementaria cuando se utilizan ambas técnicas dentro de un algoritmo diagnóstico².
En el metaanálisis de Candia-Puma et al., las pruebas de hemaglutinación presentaron una mediana de sensibilidad del 75 % y una mediana de especificidad del 99 %⁴.
La diferencia observada respecto a ELISA pone de manifiesto la importancia de seleccionar adecuadamente las pruebas diagnósticas y de no interpretar una técnica de forma aislada⁴.
ELISA presenta como principales ventajas la posibilidad de automatización, el procesamiento de grandes cantidades de muestras y la lectura instrumental. Estas características favorecen su utilización en laboratorios clínicos y en programas de cribado³.
La HAI presenta un principio diferente y puede ser útil como prueba complementaria. Su utilización junto con otra técnica permite comparar resultados obtenidos mediante metodologías diferentes y aumentar la seguridad del diagnóstico².
El metaanálisis de Candia-Puma et al. mostró un rendimiento superior de ELISA frente a las pruebas de hemaglutinación incluidas en el estudio. La mediana de sensibilidad fue del 99 % para ELISA y del 75 % para hemaglutinación, mientras que la mediana de especificidad fue del 99 % para ambas técnicas⁴.
Sin embargo, estos resultados deben interpretarse teniendo en cuenta que el rendimiento diagnóstico depende de las características concretas de cada ensayo. Por ello, no sería correcto considerar que todas las pruebas ELISA presentan necesariamente el mismo rendimiento ni que todas las pruebas de hemaglutinación presentan los mismos valores⁴.
Una de las dificultades del diagnóstico serológico aparece cuando dos pruebas proporcionan resultados diferentes. Esta situación puede relacionarse con diferencias entre los antígenos utilizados, la sensibilidad de cada método o determinadas reacciones inespecíficas².
Ante un resultado discordante, las recomendaciones internacionales apoyan la realización de una tercera prueba basada en una metodología o preparación antigénica diferente².
La utilización de procedimientos normalizados de trabajo y controles de calidad es igualmente importante para reducir errores relacionados con el procesamiento y la interpretación de las muestras. La OMS señala la importancia de aplicar buenas prácticas de laboratorio y procedimientos de control de calidad para garantizar la fiabilidad de los resultados serológicos⁵.
El diagnóstico serológico tiene un papel fundamental en la fase crónica de la enfermedad de Chagas debido a la baja parasitemia característica de esta etapa¹.
ELISA destaca por su elevado rendimiento diagnóstico y por las ventajas que ofrece para el procesamiento automatizado de numerosas muestras. Los estudios disponibles muestran valores elevados de sensibilidad y especificidad, aunque estos pueden variar según las características de cada ensayo³, ⁴.
La hemaglutinación indirecta constituye una metodología complementaria que utiliza un principio diferente. Aunque el rendimiento observado en el metaanálisis fue inferior al de ELISA en términos de sensibilidad, puede formar parte de una estrategia basada en la combinación de diferentes pruebas⁴.
La evidencia disponible respalda que el diagnóstico de la infección crónica no debe depender de una única prueba. La utilización de dos pruebas basadas en diferentes antígenos permite aumentar la fiabilidad del resultado y, ante una discordancia, la realización de una tercera prueba puede ayudar a establecer el diagnóstico definitivo².
CONCLUSIONES
En conclusión, ELISA y la hemaglutinación indirecta son herramientas útiles en el diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas. ELISA presenta ventajas importantes relacionadas con su rendimiento y automatización, mientras que la HAI puede aportar información complementaria. La combinación de metodologías, junto con procedimientos adecuados de control de calidad, permite mejorar la seguridad diagnóstica de la infección crónica por Trypanosoma cruzi², ⁴.
- World Health Organization. Enfermedad de Chagas (tripanosomiasis americana) [Internet]. Ginebra: Organización Mundial de la Salud; 2026 [citado 20 ago 2026]. Disponible en: https://www.who.int/es/news-room/questions-and-answers/item/chagas-disease
- World Health Organization. Guidelines for the diagnosis and treatment of Chagas disease [Internet]. Washington, D.C.: Organización Panamericana de la Salud; 2018 [citado 20 ago 2026]. Disponible en: https://www.who.int/publications/i/item/9789275120439
- Umezawa ES, Luquetti AO, Levitus G, Ponce C, Ponce E, Henriquez D, et al. Serodiagnosis of chronic and acute Chagas’ disease with Trypanosoma cruzi recombinant proteins: results of a collaborative study in six Latin American countries. J Clin Microbiol. 2004;42(1):449-452. Disponible en: https://doi.org/10.1128/JCM.42.1.449-452.2004
- Candia-Puma MA, Machaca-Luque LY, Roque-Pumahuanca BM, Galdino AS, Giunchetti RC, Coelho EAF, et al. Accuracy of diagnostic tests for the detection of Chagas disease: a systematic review and meta-analysis. Diagnostics (Basel). 2022;12(11):2752. Disponible en: https://doi.org/10.3390/diagnostics12112752
- World Health Organization. Control of Chagas disease: second report of the WHO Expert Committee. Geneva: World Health Organization; 2002. 109 p. (WHO Technical Report Series; 905). Disponible en: https://iris.who.int/bitstream/10665/42443/1/WHO_TRS_905.pdf
